純化線(xiàn)粒體ADP光譜法定量檢測試劑盒所帶 DNA 純化柱,具有在高鹽、低 pH 值情況下吸附 DNA, 低鹽、高 pH 值情況下釋放 DNA 的 性質(zhì) . 該試劑盒能從各個(gè)等級的瓊脂糖凝膠中很好的回收 50bp-40kb 的 DNA 帶 , 回收率高達 85%.目的 DNA 帶從凝 膠上切下來(lái)后,經(jīng)特定的溶液 BD 處理,可將含目的帶的瓊脂糖溶解* , 然后轉移到一個(gè) DNA 回收純化柱上, 經(jīng)過(guò)溶液 PE 快速的洗滌步驟后, DNA 便可用去離子水 (或低鹽緩沖液) 洗脫出來(lái), 回收產(chǎn)物可用于 PCR 、 連接、 測序、限制性酶切等應用。純化線(xiàn)粒體ADP光譜法定量檢測試劑盒還適用于 PCR 產(chǎn)物純化、酶切產(chǎn)物回收及基因組 DNA 純化。
初次使用本試劑盒時(shí),請將 RNase A全部加入到溶液Ⅰ中,均勻混合后 4℃保存。溶液Ⅱ:室溫保存,若出現 沉淀,請于 37℃保溫溶解,待恢復至室溫后使用。其他試劑:室溫保存。
純化線(xiàn)粒體ADP光譜法定量檢測試劑盒操作步驟:
1. 用 1.5 ml離心管收集 1.5-5ml 菌液, 12000rpm 離心 60秒,棄上清。(應根據所培養的菌液的濃度確定收集的菌液量 )
2. 加入 250?l溶液Ⅰ/RNase A混合液,漩渦振蕩使菌液*重新懸浮。(菌液重新懸浮對于獲得高產(chǎn)量是非常重要的 , 為使 RNA 被 RNase A充分降解 , 讓?xiě)腋【红o置 1-2分鐘 3. 250?l溶液Ⅱ,溫和反復顛倒混勻 4-10次 , 室溫放置 1-2分鐘 , 以獲得澄清的裂解液。(不可劇烈混和 , 否則會(huì )使染色體 DNA 斷裂 .)
4. 加入 350?l溶液Ⅲ,反復顛倒混勻 4-6次 , 12000rpm離心 10分鐘。
5. 將上清置于 DNA 純化柱中,靜置 1-2分鐘。
6. 12000rpm 離心 60秒,棄慮液。(注:此時(shí) DNA 被吸附于 DNA 純化柱中的硅膠膜上。 )
7. 加入 500l 溶液 PB,12000rpm 離心 60秒,棄慮液。注:目的是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質(zhì)洗脫 , 得到高質(zhì)量的 DNA 。如果所需的 DNA 質(zhì)量要求不是很高此步可以省去 .
8. 加入 500l溶液 W,12000rpm 離心 60秒,棄慮液。
9. 可選做步驟 :重復步驟 8, 再用 500ul 溶液 W 洗滌柱子一次 .
10. 12000rpm 再次離心 60秒,甩干剩余液體。主要是去除殘余酒精,以利于 DNA 溶解。
11. 將 DNA 純化柱置于新的離心管中,加入適量(50-100?l) Eluent (≥60℃預熱)室溫放置 2分鐘12000rpm離心 60秒,管底即為質(zhì)粒 DNA 。注:溶液 Eluent 可用無(wú)菌雙蒸水代替,但其 pH 需為 8.0-8.5, 加入體積視質(zhì)?？截悢刀嗌?、用戶(hù)對質(zhì)粒濃度要求而定。60℃預熱,目的是提高產(chǎn)量,溫度不需很準,50℃-65℃均可。
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