銘博（上海）生物實(shí)驗室實(shí)驗時(shí)間 | 如何做好 WB 實(shí)驗？

蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot ）可以

• 從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標蛋白質(zhì)；

   

• 定量或定性確定細胞或組織中蛋白質(zhì)的表達情況；

   

• 用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA 相互作用后續分析。

Western 免疫印跡（Western Blot）原理

是將蛋白質(zhì)轉移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進(jìn)行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測。

與 Southern 或 Northern 雜交方法類(lèi)似，但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，「探針」是抗體，「顯色」用標記的二抗。

經(jīng)過(guò) PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜） 上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。

以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。