準確靈敏：試管法檢測范圍為 20 - 2000 μg/ml，如果在 60℃進(jìn)行增色反應，檢測范圍可達 5 - 250 μg /ml；微孔板法的檢測范圍為 25 - 500 μg/ml。

 

　　操作簡(jiǎn)單：所需樣品少，檢測試劑少，操作簡(jiǎn)捷，30 分鐘內完成測定。

 

　　兼容性好：不受樣品中大多數離子型和非離子型表面活性劑的影響。

 

　　穩定性好：BCA 試劑 （A 和 B）在室溫可穩定保存 12 個(gè)月；BCA 工作液可在室溫穩定保存一周；顯色反應產(chǎn)物在 1 小時(shí)內比色測定，吸收值穩定。

 

　　使用方便：提供微孔板法和試管法測定兩種檢測方法，方便用戶(hù)選擇。

 

　　精漿檸檬酸定量試劑盒使用方法

 

　　1. 按需用量配制適量BCA工作液 （可在室溫穩定保存一周）。BCA試劑A與BCA試劑B以體積比50:1混合，充分混勻。

 

　　2. 配制標準蛋白溶液（參照附表2配制），并以蒸餾水作為空白對照。

 

　　3. 將樣品作適當稀釋?zhuān)♂屢盒枧c標準品的稀釋液一致，可用1 × PBS或蒸餾水進(jìn)行稀釋?zhuān)瑯悠方ㄗh作梯度倍比稀釋?zhuān)?倍、4倍、8倍等稀釋。

 

　　4. 根據實(shí)驗方案，選擇以下其中一種方法進(jìn)行測試。

 

　　4.1微孔板法

 

　?、?分別取20 μl不同濃度標準蛋白溶液、待測樣品以及空白對照（蒸餾水）分別置于各孔，為測定準確每個(gè)加樣孔均應做復孔。

 

　?、?每孔分別加入200 μl BCA工作液，輕微震蕩混勻，動(dòng)作不可劇烈，避免交叉污染。

 

　?、?封上微孔板，放置37℃反應30分鐘 （對于低濃度樣品的檢測也可37℃反應2小時(shí)，以提高562 nm波長(cháng)吸收值，增強檢測靈敏度）。

 

　?、?取出微孔板恢復至室溫，采用 562 nm 波長(cháng)酶標儀比色。

 

　?、?計算出每孔標準蛋白和待測樣品的實(shí)際吸收值（即標準品吸收值－空白平均吸收值），然后計算出復孔平均吸收值。

 

　?、?繪制標準蛋白曲線(xiàn)。通過(guò)標準曲線(xiàn)回歸公式，計算出待測樣品的蛋白濃度。

 

　　4.2 試管法

 

　?、?分別取50 μl不同濃度標準蛋白溶液、待測樣品以及空白對照（蒸餾水）置于1.5 ml干凈的Eppendorf管，并作好標記（建議每管均應做2 - 3個(gè)平行反應）。

 

　?、?每管分別加入1 ml BCA工作液，立即混勻。

 

　?、?放置37℃反應30分鐘（如果放置60℃反應30分鐘，低檢測蛋白濃度可達5 μg/ml）。

 

　?、?試管恢復至室溫，采用562 nm波長(cháng)比色（使用0.5厘米光程比色杯），以空白對照管調零，然后進(jìn)行標準蛋白和待測樣品比色測定。

 

　?、?計算出標準蛋白與待測樣品復管平均吸收值。

 

　?、?繪制標準蛋白曲線(xiàn)。通過(guò)標準曲線(xiàn)回歸公式，計算出待測樣品的蛋白濃度。

 

　　精漿檸檬酸定量試劑盒注意事項

 

　　1. 請在使用本產(chǎn)品前仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。本產(chǎn)品僅用于科研，不可用于診斷。

 

　　2. 為了您的安全和健康，請穿戴實(shí)驗防護服、手套、口罩等必要的防護裝備。

 

　　3. 每次使用前請檢查試劑是否出現沉淀。如果有沉淀，請在37℃溫浴，溶解沉淀后再使用。如果有任何試劑出現變色或微生物污染即丟棄。

 

　　4. BCA法測定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì )隨時(shí)間的延長(cháng)不斷加深，因此所有樣品的測定需在10分鐘內完成，否則會(huì )影響蛋白定量的準確度。

 

　　5. 待測樣品中如含有較高濃度的非離子型表面活性劑，普通Lowry法會(huì )因反應液出現沉淀而無(wú)法檢測，BCA檢測法則不會(huì )有此情況發(fā)生，但是會(huì )導致待測樣品顯色反應加深，仍將產(chǎn)生測定誤差。

 

　　6. 待測樣品中如含有鰲合劑，或處于強酸、強堿條件則會(huì )導致負吸收值。

 

　　7. 如含有脂類(lèi)物質(zhì)會(huì )導致吸收值明顯升高。

 

　　8. 如因上述干擾因素存在，造成測定誤差，請通過(guò)稀釋、透析或其他處理方式，使干擾物質(zhì)濃度降至BCA檢測大兼容濃度以下，或選用聯(lián)科生物生產(chǎn)的抗干擾蛋白定量試劑盒直接進(jìn)行測定。

 

　　9. 如果酶標儀沒(méi)有562 nm檢測波長(cháng)，540 - 590 nm之間的波長(cháng)也可接受。