冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是結締組織染色中經(jīng)典的一種方法，是顯示組織中纖維的主要方法之一，是膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。該法染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)，分子的大小由分子量來(lái)體現，小分子量易穿透結構致密、滲透性低的組織；而大分子量則只能進(jìn)入結構疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或苯胺藍的分子量都很大，因此Masson染色后肌纖維呈紅色，膠原纖維呈綠色或藍色，主要用于區分膠原纖維和肌纖維。

 

　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒操作注意事項

 

　　1、 切片脫蠟應盡量干凈。

 

　　2、 組織固定起著(zhù)非常重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時(shí)間。

 

　　3、 經(jīng)典 masson 三色染色中，常要求使用試劑（A）染核，也可用 Harris 蘇木精染核，但 Harris 蘇木精染核后切片顏色不夠鮮艷，因為染色目的主要在于區分膠原纖維和肌纖 維，一般也可以省略該染色步驟。

 

　　4、 試劑（B）的分化時(shí)間應該依據切片厚薄、組織的類(lèi)別和新舊而定，。

 

　　5、 試劑（E）為 0.2%乙酸水溶液，可使色彩更清晰鮮艷，如果使用量大可自行配制。

 

　　6、 用試劑（F）分化要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色；纖維呈紅色即可。分化時(shí)間根 據染色深淺而定，一般 1～2min。

 

　　7、 返藍液常使用氨水水溶液，亦可自行配制 Scoot 促藍液或 0.1～1%碳酸鋰水溶液，該 產(chǎn)品森貝伽有售。

 

　　8、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

 

　　9、 冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒使用場(chǎng)所應通風(fēng)，并遠離火源。

 

　　全組織細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是設計用來(lái)標記活細胞的線(xiàn)粒體的，使之帶紅色熒光。本試劑盒使用一種專(zhuān)屬染料，選擇性地在不同膜電位的線(xiàn)粒體中積累。這種線(xiàn)粒體指示劑是一種疏水性復合物，可以輕易地滲透進(jìn)入活細胞中，且當進(jìn)入細胞后就被鎖定在線(xiàn)粒體中。這種熒光性線(xiàn)粒體指示劑可以在線(xiàn)粒體中保留很長(cháng)時(shí)間，因為該指示劑帶有能定位于細胞的基團。

 

　　其關(guān)鍵特征是其染色效率顯著(zhù)性提高。本標記方法十分穩定，需要親手操作的地方很少。它可以用于許多熒光研究中，例如微孔板分析，免疫組化和流式細胞術(shù)。全組織細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒也可以用于多種不同類(lèi)型的研究中，包括細胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細胞活性、細胞凋亡和細胞毒性的研究。本試劑盒提供所有的必需組分和佳細胞標記方法。它適用于增殖型和非增殖型細胞，也可以用于懸浮和貼壁細胞。

 

　　疫印跡重要也是后一步就是酶與底物反應進(jìn)行檢測，本試劑盒以化學(xué)熒光發(fā)光方法檢測蛋白質(zhì)或核酸類(lèi)生物大分子。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以一抗及辣根過(guò)氧化物酶HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。

 

　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是一種旨在通過(guò)長(cháng)波長(cháng)的熒光染料特異性地聚集在線(xiàn)粒體，并呈現紅色，用于分析和觀(guān)察線(xiàn)粒體活性與形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。其適用于各種冰凍切片組織線(xiàn)粒體的形態(tài)觀(guān)察、活性探測和定位標記。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，活體檢測，分辨率高，操作簡(jiǎn)捷，性能穩定，滯留持久。

 

　　線(xiàn)粒體是細胞中重要的細胞器，其主要功能是提供細胞內各種物質(zhì)代謝所需要的能量。線(xiàn)粒體大量存在于代謝旺盛的細胞中，如動(dòng)物的心肌，肝，腎等器官和組織的細胞中。大量制備線(xiàn)粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養細胞中提取。在光學(xué)顯微鏡下線(xiàn)粒體呈現為顆粒狀、棒狀或彎曲細線(xiàn)。線(xiàn)粒體熒光探針，是一種含有硫醇氯甲基基團的熒光染料，自由通過(guò)細胞膜，選擇性地聚集在線(xiàn)粒體。它可以對活細胞進(jìn)行直接染色，在580nm波長(cháng)可以清晰看到被染成紅色的線(xiàn)狀或顆粒小體的線(xiàn)粒體。并可以分析線(xiàn)粒體膜電位，以檢測線(xiàn)粒體活性。

 

　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒染色原理：

 

　　1、細胞核染色的原理：

 

　　蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著(zhù)色。細胞核內染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。

 

　　2、細胞漿染色的原理：

 

　　伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著(zhù)色。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結合，使細胞漿著(zhù)色，呈現紅色。

 

　　3、分化作用：

 

　　冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用，所用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結構，使組織與色素分離而退色。經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過(guò)多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。

 

　　4、返藍作用：

 

　　分化之后，冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現藍色，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍作用或藍化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細胞核返藍，但所需時(shí)間較長(cháng)。