冰凍切片氧化應激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

 冰凍切片氧化應激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑是一種旨在通過(guò)透膜熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生熒光，來(lái)定量檢測冰凍組織內活性氧族的存在狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗證明的。適宜于冰凍動(dòng)物組織的分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，定性檢測，性能穩定。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2^-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線(xiàn)態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細胞內活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導致細胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一種*自由通過(guò)細胞膜的染色劑。一旦被過(guò)氧化氫、過(guò)氧化基、過(guò)氧亞硝基陰離子等氧化，便產(chǎn)生熒光。據此測定組織細胞內活性氧族的濃度。 

產(chǎn)品內容

 清理液（Reagent A）    50毫升

 染色液（Reagent B）    100微升

 稀釋液（Reagent C）    50毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份

保存方式

保存 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶(hù)自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養箱：用于染色孵育

熒光顯微鏡：用于觀(guān)察熒光組織

實(shí)驗步驟

實(shí)驗開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化， 稀釋液（Reagent C）置于室溫預熱。然后移出10微升 染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入990微升 稀釋液（Reagent C），混勻后，標記為 染色工作液，置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

• 準備5片待測的厚為10微米的未經(jīng)固著(zhù)處理的冰凍切片
• 置于室溫下，小心加上500微升預冷的 清理液（Reagent A），鋪滿(mǎn)整個(gè)切片表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升室溫預熱的 染色工作液，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片表面
• 在37℃濕潤培養箱里，孵育20分鐘（注意：避免液體蒸發(fā)）
• 小心移去切片上的 染色工作液，避免光照
• 小心加上500微升 清理液（Reagent A），鋪滿(mǎn)整個(gè)切片表面
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在熒光顯微鏡下觀(guān)察（定性檢測）：激發(fā)波長(cháng)490nm，散發(fā)波長(cháng)530nm――熒光增強，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 建議使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時(shí)內）制成的冰凍切片
• 操作時(shí)，須戴手套
•  染色工作液避免光照
• 孵育時(shí)，須避免光照
• 建議組織染色完成后，即刻進(jìn)行熒光定性分析
• 本公司提供陽(yáng)性對照甲萘醌溶液，觀(guān)察組織熒光增強現象
• 本公司提供系列活性氧檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰